Plasmide CRISPR/Cas9 KO ADAM5 (m): sc-418991

Présentation

Adam5 code ADAM5, un membre de la famille ADAM (« a disintegrin and metalloproteinase ») impliquée dans la protéolyse associée à la membrane et dans les interactions cellule–cellule ou cellule–matrice. Les protéines ADAM peuvent influencer le clivage (« shedding ») de l’ectodomaine des protéines de surface, modulant ainsi la dynamique des signaux, l’adhésion et les processus de remodelage tissulaire. Dans les systèmes murins, ADAM5 est étudiée dans le contexte d’une régulation dépendante des protéases de la biologie du développement et de la reproduction, avec des liens potentiels vers des voies contrôlant la communication cellulaire et la perception de l’environnement extracellulaire. La dérégulation d’activités apparentées de la famille ADAM est associée à la signalisation inflammatoire et à des phénotypes pertinents pour le cancer, ce qui fait d’Adam5 une cible utile pour des études mécanistiques des réseaux de signalisation pilotés par la protéolyse.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO ADAM5 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Adam5 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Adam5, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Adam5 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine ADAM5.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Adam5 pour l'étude de la signalisation de ADAM5, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Adam5 essentiels à la fonction de ADAM5
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Adam5 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le ADAM5 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le ADAM5 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Adam5. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le ADAM5 plasmide HDR (m) et le ADAM5 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Adam5 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Adam5 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.