Plasmide CRISPR d'Activation (h) ADAM28: sc-404031-ACT

ADAM28 code une métalloprotéase ancrée à la membrane de la famille ADAM (a disintegrin and metalloprotease), qui assure le clivage de l’ectodomaine (ectodomain shedding) et intervient dans les interactions cellule–cellule ou cellule–matrice via ses domaines désintégrine et protéase. En régulant la disponibilité des récepteurs de surface, des molécules d’adhérence et des médiateurs solubles, ADAM28 influence des voies de signalisation dépendantes de la protéolyse, le trafic des leucocytes et le remodelage tissulaire. L’expression d’ADAM28 a été étudiée dans des contextes de recrutement de cellules inflammatoires et de remodelage du microenvironnement tumoral, où une activité protéasique altérée peut modifier la dynamique d’adhérence et la réponse aux cytokines. En tant que protéase associée à la surface cellulaire, ADAM28 est fréquemment examinée dans des voies liées à la régulation de la matrice extracellulaire, à la signalisation immunitaire et aux phénotypes migratoires.

ADAM28 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ADAM28 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

ADAM28 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ADAM28 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ADAM28, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de ADAM28. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ADAM28 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de ADAM28 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie ADAM28 dans les cellules tumorales présentant une expression de ADAM28 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.