Plasmide CRISPR d'Activation (h) ADAM19: sc-408791-ACT

ADAM19 code une métalloprotéase-disintégrine ancrée à la membrane qui régule le clivage (shedding) de l’ectodomaine des protéines de surface cellulaire et module les interactions cellule–cellule et cellule–matrice. Par le traitement protéolytique de molécules de signalisation et d’adhérence, ADAM19 influence des voies associées à la signalisation des facteurs de croissance, aux réponses inflammatoires et au remodelage de la matrice extracellulaire. Son activité a été étudiée dans des contextes tels que le développement, la réparation tissulaire et la régulation des microenvironnements immunitaires et stromaux. Une expression dérégulée d’ADAM19 ou une altération de sa fonction protéasique a été associée à un remodelage pathologique et à des dynamiques de signalisation modifiées observées dans plusieurs modèles pertinents pour les maladies, notamment dans des processus cardiovasculaires et oncogéniques.

ADAM19 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ADAM19 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

ADAM19 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ADAM19 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ADAM19, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de ADAM19. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ADAM19 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de ADAM19 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie ADAM19 dans les cellules tumorales présentant une expression de ADAM19 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.