Plasmide Double Nickase (h) ADAM10: sc-400883-NIC

ADAM10 code une métalloprotéase transmembranaire dépendante du zinc de la famille ADAM, qui assure le clivage (« shedding ») de l’ectodomaine de diverses protéines de surface cellulaire, remodelant ainsi la disponibilité des récepteurs et la communication cellule–cellule. ADAM10 participe à la protéolyse intramembranaire régulée et influence la signalisation Notch, la maturation de l’APP, ainsi que le clivage de molécules d’adhérence et de modulation immunitaire telles que les cadhérines, des ligands et des récepteurs de cytokines. Par ces activités, il affecte le développement neuronal, la fonction synaptique, la biologie de la barrière épithéliale et les réponses immunitaires, en intégrant des signaux au sein de réseaux de signalisation proximaux de la membrane. Une activité ou une expression d’ADAM10 dérégulée a été impliquée dans des voies de signalisation associées au cancer et des phénotypes d’invasion, dans des mécanismes neurodégénératifs liés au métabolisme de l’APP, ainsi que dans la physiopathologie inflammatoire, ce qui soutient son intérêt comme cible mécanistique dans des études de voies de signalisation.

ADAM10 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ADAM10 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ADAM10. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ADAM10. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ADAM10.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.