Plasmide CRISPR d'Activation (m) ACSL5: sc-436628-ACT

Le gène murin **Acsl5** code l’acyl‑CoA synthétase de la famille des acyl‑CoA synthétases à longue chaîne, membre 5 (**ACSL5**), une enzyme associée aux mitochondries qui active les acides gras à longue chaîne en thioesters d’acyl‑CoA, les engageant ainsi vers la β‑oxydation, la synthèse des triglycérides et le remodelage des phospholipides. En modulant les réserves d’acyl‑CoA et les flux lipidiques, ACSL5 influence le métabolisme énergétique mitochondrial, la composition membranaire et la signalisation médiée par les lipides. Une activité altérée d’ACSL5 a été associée à des dérégulations métaboliques, notamment la stéatose hépatique et la résistance à l’insuline, et fait fréquemment l’objet d’études dans des contextes où l’utilisation des lipides et le métabolisme oxydatif contribuent aux réponses au stress cellulaire.

ACSL5 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Acsl5 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

ACSL5 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Acsl5 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Acsl5, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de ACSL5. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Acsl5 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de ACSL5 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie ACSL5 dans les cellules tumorales présentant une expression de Acsl5 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.