Plasmide Double Nickase (h) ACSL1: sc-402922-NIC

ACSL1 (acyl‑CoA synthétase 1, membre de la famille des synthétases d’acyl‑CoA à longue chaîne) catalyse l’activation, dépendante de l’ATP, des acides gras à longue chaîne en acyl‑CoA, une étape déterminante qui oriente les lipides vers la β‑oxydation mitochondriale, la synthèse des triglycérides et des phospholipides, ainsi que la signalisation dérivée des lipides. En contrôlant la composition du pool d’acyl‑CoA, ACSL1 influence le remodelage des membranes, la dynamique des gouttelettes lipidiques et le couplage métabolique entre l’entrée des acides gras et les voies en aval d’oxydation ou de stockage. Son activité est étroitement liée aux programmes métaboliques régulés par les PPAR et à des réseaux plus larges qui gouvernent la sensibilité à l’insuline, l’inflammation et l’homéostasie énergétique cellulaire. Des altérations de l’expression ou de la régulation d’ACSL1 ont été associées à une dérégulation métabolique et à des phénotypes induits par les lipides pertinents pour l’obésité, le diabète de type 2 et la biologie cardiovasculaire, ce qui soutient des études mécanistiques dans des modèles cellulaires pertinents pour ces maladies.

ACSL1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ACSL1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ACSL1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ACSL1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ACSL1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.