Plasmide CRISPR d'Activation (m) ACOT11: sc-435977-ACT

Acot11 code l’acyl‑CoA thioestérase 11 (ACOT11), une enzyme mitochondriale du métabolisme lipidique qui hydrolyse les acyl‑CoA d’acides gras à longue chaîne en acides gras libres et en CoA, modulant ainsi la taille du pool d’acyl‑CoA et le flux de β‑oxydation en aval. En modulant la disponibilité des substrats mitochondriaux et des intermédiaires de signalisation lipidique, ACOT11 influence l’équilibre énergétique, le métabolisme oxydatif et la gestion des lipides par le tissu adipeux. Dans des modèles murins, des altérations de l’activité d’ACOT11 ont été associées à des phénotypes métaboliques impliquant la thermogenèse et l’utilisation des nutriments, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude de la fonction mitochondriale, de l’homéostasie des acides gras et des réponses au stress métabolique.

ACOT11 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Acot11 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

ACOT11 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Acot11 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Acot11, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de ACOT11. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Acot11 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de ACOT11 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie ACOT11 dans les cellules tumorales présentant une expression de Acot11 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.