ACLP/AEBP1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-419033-ACT

Aebp1 codifica ACLP/AEBP1, uma proteína associada à matriz extracelular implicada na organização do colágeno, na ativação de fibroblastos e na modulação de programas de remodelamento tecidual. Em células de camundongo, a ACLP/AEBP1 tem sido associada à regulação de redes de sinalização do estroma, incluindo vias que influenciam respostas inflamatórias e processos fibróticos associados ao TGF-β. A expressão alterada de Aebp1 é frequentemente estudada no contexto da deposição de matriz extracelular, da biologia vascular e do tecido adiposo, e da diferenciação de células mesenquimais. Essas funções fazem de Aebp1 um alvo útil para investigar a regulação do comportamento celular pelo microambiente e fenótipos de remodelamento relevantes para doenças em modelos de pesquisa biomédica.

ACLP/AEBP1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Aebp1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

ACLP/AEBP1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Aebp1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Aebp1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de ACLP/AEBP1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Aebp1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de ACLP/AEBP1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via ACLP/AEBP1 em células tumorais com expressão de Aebp1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.