Plasmide Double Nickase (h) AChE: sc-401091-NIC

Le gène humain **ACHE** code l'acétylcholinestérase (AChE), une hydrolase à sérine qui met rapidement fin à la neurotransmission cholinergique en hydrolysant l'acétylcholine au niveau des synapses et des jonctions neuromusculaires. Au-delà de l'élimination du neurotransmetteur, l'AChE contribue à l'homéostasie de la signalisation cholinergique, à la plasticité synaptique et à la communication cellule–cellule, avec des fonctions dépendantes des isoformes et de la localisation à la surface cellulaire et dans la matrice extracellulaire. Une expression ou une activité dérégulée d'**ACHE** est liée à une excitabilité neuronale modifiée et a été associée à des phénotypes neurodégénératifs et neurodéveloppementaux, ainsi qu'à des dysfonctionnements neuromusculaires. Dans les systèmes expérimentaux, la perturbation d'**ACHE** est utilisée pour étudier la régulation des voies cholinergiques, l'organisation synaptique et les relations structure–fonction de l'enzyme.

AChE Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ACHE dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ACHE. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ACHE. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ACHE.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.