Plasmide Double Nickase (h) ACCβ: sc-401903-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) ACCβ correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide ACCβ Double Nickase (h) et le plasmide ACCβ Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant ACACB. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: ACCβ Antibody (F-9): sc-377313
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) ACCβ | sc-401903-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) ACCβ | sc-401903-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ACACB code l’acétyl‑CoA carboxylase bêta (ACCβ), une carboxylase biotine‑dépendante qui catalyse la formation de malonyl‑CoA au niveau de la membrane mitochondriale externe. En contrôlant les niveaux de malonyl‑CoA, ACCβ régule la β‑oxydation des acides gras via l’inhibition de CPT1, reliant ainsi la détection des nutriments au choix des substrats énergétiques mitochondriaux et au maintien de l’homéostasie énergétique cellulaire. L’activité d’ACACB s’intègre aux voies de signalisation d’AMPK, aux programmes métaboliques sensibles à l’insuline et aux voies de prise en charge des lipides qui façonnent le métabolisme oxydatif dans le muscle et d’autres tissus. Une dérégulation de la fonction d’ACCβ et du flux de malonyl‑CoA est associée à des phénotypes métaboliques pertinents pour l’obésité, la résistance à l’insuline et la stéatose hépatique, ce qui étaye des études mécanistiques sur le stress cellulaire induit par les lipides et l’inflammation.
ACCβ Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ACACB dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ACACB. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ACACB. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ACACB.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.