Plasmide Double Nickase (h) ACAT-1: sc-402300-NIC

ACAT1 code l'acétyl‑CoA acétyltransférase mitochondriale 1 (ACAT‑1), une thiolase qui catalyse la coupure thiolytique réversible de l'acétoacétyl‑CoA en acétyl‑CoA, reliant l'utilisation des corps cétoniques à la disponibilité cellulaire en acétyl‑CoA. Cette enzyme participe au catabolisme mitochondrial des acides gras et des acides aminés à chaîne ramifiée, et influence l'homéostasie énergétique en s'intégrant au cycle de l'acide citrique (cycle de Krebs) et à une régulation métabolique dépendante de l'acétylation. Des altérations de l'activité d'ACAT1 ont été associées à des erreurs innées du métabolisme des corps cétoniques et à des phénotypes plus larges de dysfonctionnement mitochondrial, ce qui en fait une cible pertinente pour l'étude du stress métabolique, de l'équilibre rédox et de la signalisation dépendante des nutriments. ACAT‑1 est également étudiée dans le contexte du remodelage métabolique des cellules cancéreuses et des défauts bioénergétiques liés à la neurodégénérescence, où le flux d'acétyl‑CoA et la fonction mitochondriale sont perturbés.

ACAT-1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ACAT1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ACAT1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ACAT1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ACAT1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.