ACADVL (VLCAD) Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-403111-LAC

ACADVL codifica l’acil-CoA deidrogenasi a catena molto lunga (VLCAD), una flavoproteina mitocondriale che catalizza il primo passaggio di deidrogenazione nella β-ossidazione degli acil-CoA di acidi grassi a catena lunga. VLCAD sostiene la produzione di energia a partire dagli acidi grassi, contribuendo all’equilibrio redox mitocondriale e alla flessibilità metabolica in tessuti con elevata richiesta ossidativa, come cuore e muscolo scheletrico. L’alterazione o la riduzione dell’attività di ACADVL è associata a una compromissione dell’ossidazione degli acidi grassi a catena lunga, a profili di acilcarnitine alterati e all’attivazione di risposte cellulari allo stress mitocondriale. Questi difetti metabolici vengono studiati nel contesto dei disordini ereditari dell’ossidazione degli acidi grassi e, più in generale, nella ricerca sulla disfunzione cardiometabolica e sui meccanismi delle malattie mitocondriali.

Le particelle di attivazione lentivirale ACADVL (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di ACADVL in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale ACADVL (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione ACADVL, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di ACADVL. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo ACADVL e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.