Plasmide Double Nickase (h) ACADS: sc-405458-NIC

ACADS code la déshydrogénase des acyl-CoA à chaîne courte, une flavoprotéine mitochondriale qui catalyse l’étape initiale de déshydrogénation de la β‑oxydation des acyl‑CoA d’acides gras à chaîne courte, reliant le catabolisme des acides gras à la production d’énergie en situation de jeûne et de stress métabolique. En transférant des électrons vers le système de la flavoprotéine de transfert d’électrons et les composants en aval de la chaîne respiratoire, ACADS contribue au maintien de l’équilibre rédox mitochondrial et à un flux efficace au sein des voies d’oxydation des acides gras. Une altération de la fonction d’ACADS est associée à une oxydation déficiente des acides gras à chaîne courte, à une acidose métabolique et à des symptômes neuromusculaires observés dans le déficit en déshydrogénase des acyl‑CoA à chaîne courte, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude des erreurs innées du métabolisme. ACADS constitue également un point d’entrée utile pour explorer le métabolisme mitochondrial, les réponses au stress oxydatif et la signalisation dérivée des lipides dans les cellules humaines.

ACADS Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ACADS dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ACADS. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ACADS. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ACADS.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.