Plasmide Double Nickase (h) 14-3-3 ζ: sc-400490-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) 14-3-3 ζ correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide 14-3-3 ζ Double Nickase (h) et le plasmide 14-3-3 ζ Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant YWHAZ. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: 14-3-3 ζ Antibody (1B3): sc-293415
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) 14-3-3 ζ | sc-400490-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) 14-3-3 ζ | sc-400490-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
YWHAZ code la protéine humaine 14-3-3 zêta, un adaptateur conservé se liant aux phosphosérines/phosphothréonines, qui module la stabilité, la localisation et l’activité de nombreuses protéines de signalisation. En servant de plateforme aux réseaux de kinases et de phosphatases, 14-3-3 zêta contribue au contrôle des voies PI3K–AKT et MAPK ainsi qu’aux points de contrôle du cycle cellulaire, influençant l’apoptose, les réponses aux dommages de l’ADN et la dynamique du cytosquelette. Une expression altérée de YWHAZ ou une dérégulation des interactions 14-3-3 a été associée, dans des modèles de cancer, à une prolifération aberrante, à une signalisation de stress et à des phénotypes métastatiques ; ces aspects ont également été étudiés en neurobiologie et dans la régulation métabolique, où la fidélité de la signalisation est essentielle.
14-3-3 ζ Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus YWHAZ dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de YWHAZ. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de YWHAZ. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de YWHAZ.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.