Plasmide CRISPR/Cas9 KO γE-crystallin (m): sc-419832

Présentation

Cryge code la γE-cristalline, une protéine structurale des cellules des fibres du cristallin appartenant à la superfamille des cristallines β/γ, qui contribue à l’indice de réfraction exceptionnellement élevé et à la transparence à long terme du cristallin. La γE-cristalline participe au processus finement régulé de différenciation et de maturation des cellules des fibres du cristallin, dans lequel l’empilement des cristallines, la stabilité des protéines et la résistance à l’agrégation sont au cœur de la protéostasie. Une perturbation de l’homéostasie des cristallines peut favoriser la formation d’agrégats diffusant la lumière et compromettre la biomécanique du cristallin, reliant ainsi les altérations des gènes de cristallines à des phénotypes associés à la cataracte et à des mécanismes d’opacification du cristallin. Dans des modèles murins, Cryge est étudié afin de comprendre l’organisation du réseau de cristallines, les modifications post-traductionnelles et les réponses au stress qui influencent, au fil du temps, la clarté du cristallin.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO γE-crystallin (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Cryge dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Cryge, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Cryge à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine γE-crystallin.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Cryge pour l'étude de la signalisation de γE-crystallin, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Cryge essentiels à la fonction de γE-crystallin
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Cryge pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le γE-crystallin plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le γE-crystallin plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Cryge. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le γE-crystallin plasmide HDR (m) et le γE-crystallin (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Cryge pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Cryge définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.