Plasmide CRISPR/Cas9 KO β-defensin 1 (m): sc-419980

Présentation

Defb1 code la β-défensine 1 murine, un petit peptide antimicrobien cationique produit par les cellules épithéliales et enrichi aux surfaces barrières, telles que les voies respiratoires, le tractus gastro-intestinal et l’appareil urogénital. La β-défensine 1 contribue à la défense immunitaire innée par une activité microbicide directe et en modulant la composition du microbiome des muqueuses, tout en agissant également comme immunomodulateur capable d’influencer le recrutement des leucocytes et la signalisation des cytokines. Son expression est liée à des programmes de différenciation épithéliale et à des réponses inflammatoires, reliant Defb1 à des processus qui régulent l’intégrité de la barrière et les interactions hôte–pathogène. Une expression altérée des défensines a été associée à une susceptibilité aux infections et à des phénotypes de maladies inflammatoires dans des modèles expérimentaux, ce qui étaye sa pertinence pour les études d’immunologie des muqueuses et d’homéostasie épithéliale.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO β-defensin 1 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Defb1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Defb1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Defb1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine β-defensin 1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Defb1 pour l'étude de la signalisation de β-defensin 1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Defb1 essentiels à la fonction de β-defensin 1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Defb1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le β-defensin 1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le β-defensin 1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Defb1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le β-defensin 1 plasmide HDR (m) et le β-defensin 1 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Defb1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Defb1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.