Plasmide Double Nickase (h) β-2-Microglobulin: sc-417704-NIC

B2M code la β-2‑microglobuline, un composant non covalent des complexes du CMH de classe I, indispensable au repliement correct, à la stabilité et à la présentation à la surface cellulaire des molécules HLA de classe I. En soutenant la présentation des peptides aux lymphocytes T CD8+, la β-2‑microglobuline influence les voies de traitement et de présentation des antigènes et façonne la surveillance immunitaire ainsi que la reconnaissance du soi et du non-soi. Une expression altérée de B2M ou une perte de fonction peut perturber le trafic du CMH I et compromettre la présentation antigénique, un phénomène observé dans de multiples contextes d’échappement immunitaire. Ces propriétés font de B2M un marqueur largement utilisé et un nœud fonctionnel pour explorer la signalisation dépendante de l’HLA, les programmes sensibles à l’interféron et les interactions immunité–tumeur dans des modèles de cellules humaines.

β-2-Microglobulin Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus B2M dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de B2M. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de B2M. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de B2M.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.