α_2A-AR Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-419023

Panoramica

Adra2a codifica il recettore adrenergico α2A (α2A-AR) del topo, un recettore accoppiato a Gi/Go che risponde a noradrenalina e adrenalina inibendo l’adenilil ciclasi e riducendo il cAMP intracellulare. Attraverso la segnalazione dei GPCR, l’α2A-AR modula l’attività dei canali ionici, il rilascio presinaptico di neurotrasmettitori e i programmi di fosforilazione a valle dipendenti dalla PKA che modellano la trasmissione sinaptica e l’eccitabilità neuronale. Nei tessuti periferici, l’α2A-AR contribuisce alla regolazione del tono simpatico e delle risposte cellulari controllate dalle catecolamine. Una segnalazione adrenergica disregolata che coinvolge ADRA2A è stata associata a fenotipi neurocomportamentali e a tratti cardiometabolici, rendendo questo recettore rilevante per studi sulla regolazione dell’asse dello stress e sulla fisiologia autonoma.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO α2A-AR (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Adra2a in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Adra2a insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Adra2a a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina α2A-AR.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Adra2a per lo studio della segnalazione di α2A-AR, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Adra2a critici per la funzione di α2A-AR
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Adra2a per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal α2A-AR CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal α2A-AR CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Adra2a. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal α2A-AR Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR α2A-AR (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Adra2a per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Adra2a definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.