Plásmido CRISPR de Activación (h) α_1B-AR: sc-403295-ACT

ADRA1B codifica el α1B-AR humano (receptor adrenérgico alfa-1B), un GPCR sensible a catecolaminas que se acopla principalmente a proteínas Gq/11 para activar la fosfolipasa C, la señalización de fosfato de inositol, la movilización intracelular de Ca2+ y vías dependientes de la proteína quinasa C. La activación del receptor también puede involucrar la señalización MAPK/ERK y regular la dinámica del citoesqueleto, la secreción y las respuestas contráctiles en tejidos con inervación adrenérgica. El α1B-AR contribuye al control del tono vascular y la reactividad del músculo liso, e influye en la excitabilidad neuronal y la señalización sensible al estrés. La señalización adrenérgica desregulada en la que participa ADRA1B se estudia en el contexto de la fisiología cardiovascular, fenotipos neuropsiquiátricos y una señalización proliferativa alterada en sistemas modelo.

α1B-AR El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de ADRA1B sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

α1B-AR El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus ADRA1B en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional ADRA1B, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de α1B-AR. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo ADRA1B y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de α1B-AR en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía α1B-AR en células tumorales con expresión de ADRA1B silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.