Plasmide Double Nickase (h) α-KGD: sc-402915-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) α-KGD correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide α-KGD Double Nickase (h) et le plasmide α-KGD Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant OGDH. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) α-KGD | sc-402915-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) α-KGD | sc-402915-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
OGDH humain code la sous-unité E1 du complexe 2‑oxoglutarate déshydrogénase (α‑KGD), une enzyme influençant le débit du cycle de l’acide tricarboxylique (cycle de Krebs, TCA) qui convertit l’α‑cétoglutarate en succinyl‑CoA tout en produisant du NADH. Cette réaction relie le flux de carbone mitochondrial à l’équilibre rédox cellulaire et soutient la phosphorylation oxydative, l’anaplérose et le métabolisme des acides aminés via le nœud de l’α‑cétoglutarate. L’activité d’OGDH connecte également le métabolisme mitochondrial à la gestion des espèces réactives de l’oxygène et aux réponses au stress via la production de NADH et le transport d’électrons en aval. Une dérégulation des voies associées à OGDH/α‑KGD a été impliquée dans le remodelage métabolique observé dans les troubles neurologiques et dans l’adaptation bioénergétique liée au cancer, ce qui en fait une cible utile pour des études mécanistiques de la fonction mitochondriale.
α-KGD Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus OGDH dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de OGDH. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de OGDH. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de OGDH.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.