Plasmide Double Nickase (h) αA-crystallin: sc-402047-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) αA-crystallin correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide αA-crystallin Double Nickase (h) et le plasmide αA-crystallin Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant CRYAA. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: αA-crystallin Antibody (B-2): sc-28306
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) αA-crystallin | sc-402047-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) αA-crystallin | sc-402047-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CRYAA code l’αA-cristalline humaine, une petite protéine de choc thermique qui agit comme chaperon moléculaire indépendant de l’ATP afin de stabiliser les protéines partiellement dépliées et de limiter leur agrégation en conditions de stress. Dans le cristallin, l’αA-cristalline soutient la protéostasie et contribue à la transparence du cristallin en amortissant les dommages induits par le stress oxydatif, la chaleur et les UV, tout en modulant l’organisation du cytosquelette et la signalisation apoptotique dans plusieurs types cellulaires. Cette protéine participe à des réseaux de réponse au stress liés à la gestion des protéines dépliées et au maintien d’assemblages protéiques à longue durée de vie. La dérégulation ou les mutations de CRYAA sont associées à la cataractogenèse et ont été étudiées dans le cadre de réponses au stress protéotoxique pertinentes pour des phénotypes neurodégénératifs et myopathiques.
αA-crystallin Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CRYAA dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CRYAA. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CRYAA. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CRYAA.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.