Plasmide CRISPR/Cas9 KO α-2 antiplasmin (h): sc-403792

Présentation

SERPINF2 code l’α-2 antiplasmine humaine, un inhibiteur circulant de sérine protéases qui constitue le principal inhibiteur physiologique de la plasmine et un régulateur clé de la fibrinolyse. En formant des complexes stables avec la plasmine et en étant réticulée au sein de la fibrine par le facteur XIIIa, l’α-2 antiplasmine limite la dégradation du caillot de fibrine et contribue à l’équilibre entre la coagulation et la protéolyse extracellulaire. Cette activité relie SERPINF2 au système d’activation du plasminogène, au remodelage de la fibrine et aux effets en aval sur le renouvellement de la matrice et l’homéostasie vasculaire. Une altération de la fonction ou de l’expression de SERPINF2 a été associée à une capacité fibrinolytique dérégulée et fait l’objet d’études dans le contexte de phénotypes hémorragiques et thrombotiques, ainsi que de situations inflammatoires et de remodelage tissulaire où l’activité de la plasmine est déterminante.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO α-2 antiplasmin (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène SERPINF2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du SERPINF2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert SERPINF2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine α-2 antiplasmin.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en SERPINF2 pour l'étude de la signalisation de α-2 antiplasmin, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de SERPINF2 essentiels à la fonction de α-2 antiplasmin
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de SERPINF2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le α-2 antiplasmin plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le α-2 antiplasmin plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus SERPINF2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le α-2 antiplasmin plasmide HDR (h) et le α-2 antiplasmin (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie SERPINF2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles SERPINF2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.