À la suite du test HTS initial, les composés candidats identifiés seraient soumis à une série d'essais plus raffinés pour confirmer leur spécificité et leur effet direct sur la protéine Gγ4. Ces essais secondaires pourraient inclure des études de liaison directe, telles que la résonance plasmonique de surface ou la calorimétrie de titrage isotherme, qui peuvent confirmer les interactions physiques entre la protéine Gγ4 et les activateurs candidats. En outre, d'autres essais biochimiques seront effectués pour déterminer l'effet précis des composés sur la fonction de la protéine. Une fois qu'une interaction directe est confirmée, des études structurales détaillées peuvent être réalisées. Des techniques telles que la cristallographie aux rayons X, la spectroscopie RMN ou la cryo-microscopie électronique pourraient être utilisées pour déterminer la structure tridimensionnelle de la protéine Gγ4 en complexe avec le composé activateur, révélant ainsi les détails moléculaires du mécanisme d'activation.
Ces connaissances structurelles pourraient alors guider la synthèse de molécules activatrices plus puissantes et plus spécifiques, car elles fourniraient des informations précises sur les sites de liaison de l'activateur et sur les changements de conformation de la protéine Gγ4 induits lors de la liaison. En complément de ces techniques expérimentales, la modélisation computationnelle et les simulations de dynamique moléculaire permettraient de prédire comment les activateurs interagissent avec Gγ4 au niveau atomique, ce qui peut être crucial pour comprendre le processus d'activation et pour concevoir des composés améliorés plus efficaces dans la modulation de l'activité de la protéine.
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