Plásmido CRISPR de Activación (h) Zyxin: sc-402295-ACT

El gen humano **ZYX** codifica la **zyxina**, una proteína andamiaje con dominios LIM de las adhesiones focales que coordina la remodelación del citoesqueleto de actina y la mecanotransducción en sitios de adhesión mediada por integrinas. La zyxina interactúa con **VASP/EVL** y **α-actinina** para sostener el mantenimiento de las fibras de estrés, la expansión celular y la migración direccional, conectando señales de la matriz extracelular con la contractilidad regulada por GTPasas **Rho** y con programas sensibles a **YAP/TAZ**. Mediante su tráfico entre los complejos de adhesión y el núcleo, la zyxina puede influir en respuestas transcripcionales al estrés mecánico y a perturbaciones del citoesqueleto. La expresión o localización desregulada de **ZYX** se ha asociado con alteraciones en la señalización de adhesión y fenotipos invasivos en modelos relacionados con el cáncer, así como con funciones más amplias en la remodelación tisular donde la dinámica célula–matriz es crítica.

Zyxin El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de ZYX sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Zyxin El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus ZYX en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional ZYX, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Zyxin. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo ZYX y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Zyxin en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Zyxin en células tumorales con expresión de ZYX silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.