Partículas Lentivirales de Activación (h) ZUFSP: sc-415124-LAC

ZUFSP (dedo de zinc con dominio peptidasa específico de UFM1) codifica una enzima desubiquitinante que regula la homeostasis proteica mediante actividad proteasa dirigida a modificadores tipo ubiquitina. La proteína ZUFSP se ha vinculado al control de la respuesta al daño del ADN y al mantenimiento del genoma asociado a la replicación, al modular las señales de ubiquitina en horquillas de replicación detenidas e intermediarios de reparación. A través de su función en la coordinación del procesamiento dependiente de ubiquitina, ZUFSP puede influir en vías asociadas a la cromatina, la progresión del ciclo celular y las respuestas celulares al estrés. La señalización de ubiquitina desregulada y la estabilidad genómica comprometida son características recurrentes en la biología del cáncer y la investigación en neurodegeneración, lo que convierte a ZUFSP en un nodo útil para estudios mecanísticos de proteostasis y reparación del ADN.

Las partículas de activación lentiviral ZUFSP (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de ZUFSP en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral ZUFSP (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción ZUFSP, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de ZUFSP. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo ZUFSP y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.