Partículas Lentivirales de Activación (m) ZNRF1: sc-431297-LAC

Znrf1 codifica ZNRF1, una ligasa E3 de ubiquitina tipo RING que regula el recambio de proteínas mediante la ubiquitinación y la degradación dependiente del proteasoma. En neuronas y otros tipos celulares, ZNRF1 se ha implicado en la señalización sensible al estrés que influye en la integridad axonal, la remodelación de neuritas y las respuestas al daño celular. Al modular las vías de control de calidad dependientes de ubiquitina, ZNRF1 puede moldear la dinámica del citoesqueleto y las redes de señalización posteriores vinculadas a la neurodegeneración y a modelos de degeneración relacionada con lesiones. Los estudios de ZNRF1 en ratón respaldan su relevancia para investigar la regulación de la vía de ubiquitina en el desarrollo del sistema nervioso y en fenotipos de estrés celular asociados a enfermedades.

Las partículas de activación lentiviral ZNRF1 (m) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de Znrf1 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral ZNRF1 (m) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción Znrf1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de ZNRF1. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo Znrf1 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.