Plásmido CRISPR de Activación (m) ZFHX4: sc-429838-ACT

Zfhx4 codifica la proteína homeobox con dedos de zinc ZFHX4 del ratón, un gran factor de transcripción de unión al ADN implicado en el control transcripcional de largo alcance durante el desarrollo. ZFHX4 se asocia con la regulación de la especificación de linaje y de programas de diferenciación neuronal, lo que la vincula con la modulación del estado de la cromatina y el control coordinado de redes de expresión génica. La expresión alterada de ZFHX4 o la disrupción de su regulación se ha relacionado con fenotipos del neurodesarrollo y se ha descrito en estudios de biología tumoral, lo que respalda su relevancia en vías que gobiernan la proliferación, la diferenciación y la identidad celular. Estas características hacen de Zfhx4 una diana útil para investigar los circuitos transcripcionales y los cambios reguladores de genes asociados a enfermedad en sistemas modelo de ratón.

ZFHX4 El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Zfhx4 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

ZFHX4 El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Zfhx4 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Zfhx4, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de ZFHX4. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Zfhx4 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de ZFHX4 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía ZFHX4 en células tumorales con expresión de Zfhx4 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.