ZEB Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400201-ACT

O ZEB1 humano codifica a proteína homeobox ligante de E-box com dedos de zinco ZEB, um fator de transcrição específico de sequência que se liga a motivos do tipo E-box para coordenar programas regulatórios de genes que controlam a transição epitelial–mesenquimal (EMT), a polaridade celular e a diferenciação. O ZEB1 integra sinais das vias TGF-β/SMAD, Wnt/β-catenina, Notch e MAPK e interage com redes de microRNAs, como a família miR-200, para modular a repressão e a ativação transcricionais. A atividade alterada do ZEB1 é frequentemente associada a mudanças na adesão celular, na motilidade e na plasticidade de linhagem, tornando-o relevante para estudos de fibrose, distúrbios do desenvolvimento e biologia tumoral. Como regulador central de estados transcricionais associados à EMT, o ZEB1 é amplamente utilizado como um nó molecular para investigar programas de expressão gênica dependentes do contexto.

ZEB1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ZEB1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

ZEB1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ZEB1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ZEB1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de ZEB1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ZEB1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de ZEB1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via ZEB1 em células tumorais com expressão de ZEB1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.