Plásmido CRISPR de Activación (h) XIAP: sc-416497-ACT

La proteína inhibidora de la apoptosis ligada al cromosoma X (XIAP) es un potente supresor de la muerte celular programada que se une directamente e inhibe a las caspasas efectoras como CASP3 y CASP7, así como a la caspasa iniciadora CASP9, mediante sus dominios BIR. Más allá del bloqueo de caspasas, XIAP participa en la señalización dependiente de ubiquitina a través de su actividad de ligasa E3 RING, conectándose con vías asociadas al receptor de TNF y modulando programas de supervivencia vinculados a NF-κB. A través de estas actividades, XIAP ayuda a determinar la sensibilidad celular a señales apoptóticas intrínsecas y extrínsecas y moldea respuestas adaptativas al estrés. La expresión o función desregulada de XIAP se ha asociado con umbrales alterados de apoptosis y con estados de señalización inflamatoria relevantes para la biología del cáncer y la investigación sobre desregulación inmunitaria.

XIAP El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de XIAP sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

XIAP El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus XIAP en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional XIAP, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de XIAP. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo XIAP y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de XIAP en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía XIAP en células tumorales con expresión de XIAP silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.