Plasmide CRISPR d'Activation (h) XAF1: sc-402427-ACT

XAF1 (facteur 1 associé à XIAP) est un suppresseur de tumeur pro-apoptotique qui antagonise les protéines inhibitrices de l’apoptose, dont XIAP, afin de faciliter l’activation des caspases et l’apoptose mitochondriale. Son expression est fréquemment induite par la signalisation des interférons et le stress cellulaire, ce qui relie XAF1 aux réponses immunitaires innées et aux programmes transcriptionnels qui limitent la survie en conditions délétères. Une diminution de l’expression de XAF1, via l’hyperméthylation du promoteur ou une répression transcriptionnelle, a été rapportée dans de multiples cancers et est souvent associée à une résistance à l’apoptose et à une sensibilité modifiée aux voies de réponse au stress. En tant que régulateur des décisions de destinée cellulaire, XAF1 est largement étudié dans les contextes du contrôle du cycle cellulaire, des réponses aux dommages de l’ADN et des interactions (cross-talk) avec la signalisation inflammatoire.

XAF1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de XAF1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

XAF1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus XAF1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription XAF1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de XAF1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus XAF1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de XAF1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie XAF1 dans les cellules tumorales présentant une expression de XAF1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.