Plásmido CRISPR de Activación (h) WWOX: sc-403070-ACT

WWOX (oxidoreductasa con dominio WW) codifica una proteína asociada a la supresión tumoral, localizada en el sitio frágil común FRA16D, e implicada en el mantenimiento de la estabilidad del genoma. La WWOX humana participa en redes de señalización que integran la apoptosis, las respuestas al daño del ADN y las vías de estrés celular, mediadas en parte por interacciones del dominio WW con socios ricos en prolina y por la modulación de reguladores de la transcripción. La alteración de la expresión de WWOX o la pérdida de su función se ha vinculado con la transformación oncogénica y fenotipos metastásicos en múltiples contextos tisulares, y su disrupción genética también se asocia con trastornos del neurodesarrollo, incluida la encefalopatía epiléptica. Estas propiedades hacen de WWOX un nodo estudiado con frecuencia en las vías que controlan la proliferación, la diferenciación y la muerte celular.

WWOX El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de WWOX sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

WWOX El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus WWOX en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional WWOX, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de WWOX. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo WWOX y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de WWOX en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía WWOX en células tumorales con expresión de WWOX silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.