Plásmido CRISPR de Activación (m) Wnt-5a: sc-423718-ACT

Wnt5a codifica Wnt-5a, una glicoproteína secretada que señala principalmente a través de vías Wnt no canónicas para regular la polaridad celular, la migración y la morfogénesis tisular. Wnt-5a interactúa con receptores como ROR1/2 y Frizzled para activar la polaridad celular planar y cascadas de señalización dependientes de Ca²⁺, influyendo en la dinámica del citoesqueleto y el movimiento direccional. En el ratón, Wnt5a es esencial para el patrón embrionario, el desarrollo de las extremidades y la organogénesis, y su desregulación se estudia con frecuencia en contextos de inflamación, fibrosis y señalización en el microambiente tumoral. La actividad alterada de Wnt-5a también puede modular la comunicación cruzada con la señalización de β-catenina, moldeando la diferenciación y el comportamiento de células madre/progenitoras en modelos relevantes para el desarrollo y la enfermedad.

Wnt-5a El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Wnt5a sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Wnt-5a El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Wnt5a en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Wnt5a, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Wnt-5a. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Wnt5a y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Wnt-5a en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Wnt-5a en células tumorales con expresión de Wnt5a silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.