Plasmide Double Nickase (h) Wnt-2b: sc-405478-NIC

WNT2B code pour Wnt-2b, un ligand glycoprotéique sécrété qui se lie aux récepteurs Frizzled/LRP afin de réguler la signalisation Wnt au cours de l’embryogenèse et de l’homéostasie des tissus adultes. Par ses effets sur la transcription dépendante de la β-caténine et par des interactions avec les voies Wnt non canoniques, Wnt-2b influence la spécification du destin cellulaire, la prolifération, la migration et les programmes épithélio-mésenchymateux. Une expression modifiée de WNT2B ou un contexte de signalisation altéré ont été associés à une perturbation des processus de mise en place des patrons développementaux et de remodelage dans les compartiments épithéliaux et mésenchymateux, et WNT2B est fréquemment étudié dans des modèles pertinents pour la maladie où l’activité de la voie Wnt façonne les transitions d’état cellulaire. En tant que nœud de la voie en amont de programmes transcriptionnels contrôlant la différenciation et l’architecture tissulaire, WNT2B est couramment analysé pour cartographier la dynamique de signalisation induite par les ligands et la spécificité récepteur‑ligand.

Wnt-2b Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus WNT2B dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de WNT2B. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de WNT2B. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de WNT2B.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.