WDR5 Plasmide di attivazione CRISPR (m2): sc-431247-ACT-2

Il gene murino Wdr5 codifica la proteina contenente ripetizioni WD 5 (WDR5), una scaffolding conservata associata alla cromatina che si lega alle code dell’istone H3 e organizza i complessi SET1/MLL per promuovere la metilazione di H3K4 e l’attivazione della trascrizione. WDR5 coordina la regolazione epigenetica di programmi di espressione genica che controllano lo sviluppo embrionale, la specificazione del destino cellulare e la proliferazione, modulando lo stato di promotori ed enhancer. La disregolazione del rimodellamento della cromatina dipendente da WDR5 e della metilazione di H3K4 è stata collegata a reti trascrizionali aberranti rilevanti per la trasformazione oncogenica e per disturbi dello sviluppo, rendendolo un bersaglio utile per analizzare i meccanismi di malattia guidati dall’epigenoma. L’editing genetico di Wdr5 in modelli murini supporta lo studio dell’assemblaggio dei complessi della cromatina, dei circuiti trascrizionali e della genomica funzionale in sistemi cellulari di differenziamento e rilevanti per la malattia.

WDR5 Il plasmide di attivazione CRISPR (m2) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Wdr5 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

WDR5 Il plasmide di attivazione CRISPR (m2) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Wdr5 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Wdr5, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di WDR5. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Wdr5 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da WDR5 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via WDR5 nelle cellule tumorali con espressione di Wdr5 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.