WDR22 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-435826

Übersicht

Dcaf5 kodiert WDR22, ein WD-Repeat-haltiges Protein, das mit der Biologie der DDB1–CUL4‑E3‑Ubiquitinligase in Verbindung steht, wobei WD-Repeat-Adaptorproteine dazu beitragen, die Substratspezifität der ubiquitinabhängigen Proteostase zu bestimmen. Über diese Komplexe ist WDR22 in der Lage, den regulierten Proteinabbau zu beeinflussen, der den Zellzyklusverlauf, die DNA-Replikation/Reparatur-assoziierte Qualitätskontrolle und stressresponsive Signalwege koordiniert. Veränderte Ubiquitinierungsdynamiken sind für Mechanismen der Genominstabilität und der dysregulierten Proliferation breit relevant, wodurch Dcaf5/WDR22 einen sinnvollen Zugangspunkt für die Untersuchung von Signalwegen darstellt, die in Modellsystemen mit onkogener Transformation und anderen proliferativen Erkrankungen verknüpft sind. In der Maus können genetische Veränderungen von Dcaf5 helfen, gewebespezifische und kontextabhängige Funktionen DCAF-assoziierter Ubiquitinligase-Netzwerke zu definieren.

Das WDR22 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Dcaf5-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Dcaf5-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Dcaf5 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die WDR22-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Dcaf5-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der WDR22-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Dcaf5-Exone abzielen, die für die WDR22-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Dcaf5-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom WDR22 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom WDR22 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Dcaf5-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das WDR22 HDR-Plasmid (m) und WDR22 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Dcaf5-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Dcaf5-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.