WDR1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402871-ACT

WDR1 (WD repeat domain 1), também conhecido como AIP1, é uma proteína reguladora de actina que coopera com a cofilina para promover a desmontagem e a renovação dos filamentos de actina, sustentando a remodelação dinâmica do citoesqueleto. Ao controlar a organização da F-actina, o WDR1 contribui para processos como migração celular, endocitose e ativação de células imunes, nos quais é necessária uma reorganização rápida da actina. Alterações na função do WDR1 têm sido associadas a sinalização inflamatória desregulada e fenótipos imunológicos, em linha com o seu papel na manutenção da homeostase da actina em células hematopoiéticas e em outros tipos celulares. Em modelos celulares humanos, o WDR1 é frequentemente estudado para relacionar a dinâmica do citoesqueleto com respostas ao estresse e saídas de sinalização que dependem do tráfego dependente de actina e da remodelação de membranas.

WDR1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de WDR1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

WDR1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus WDR1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição WDR1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de WDR1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus WDR1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de WDR1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via WDR1 em células tumorais com expressão de WDR1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.