Plásmido CRISPR de Activación (h) WDR1: sc-402871-ACT

WDR1 (WD repeat domain 1), también conocido como AIP1, es una proteína reguladora de la actina que coopera con la cofilina para promover el desensamblaje y el recambio de los filamentos de actina, favoreciendo una remodelación dinámica del citoesqueleto. Al controlar la organización de la F-actina, WDR1 contribuye a procesos como la migración celular, la endocitosis y la activación de células inmunitarias, donde se requiere una rápida reorganización de la actina. La alteración de la función de WDR1 se ha vinculado con una señalización inflamatoria desregulada y fenotipos inmunitarios, en consonancia con su papel en el mantenimiento de la homeostasis de la actina en células hematopoyéticas y otros tipos celulares. En modelos celulares humanos, WDR1 se estudia con frecuencia para relacionar la dinámica del citoesqueleto con respuestas al estrés y salidas de señalización que dependen del tráfico mediado por actina y de la remodelación de membrana.

WDR1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de WDR1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

WDR1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus WDR1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional WDR1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de WDR1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo WDR1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de WDR1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía WDR1 en células tumorales con expresión de WDR1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.