WDR1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-402871-ACT

WDR1 (WD repeat domain 1), noto anche come AIP1, è una proteina che regola l’actina e coopera con la cofilina per promuovere il disassemblaggio e il turnover dei filamenti di actina, supportando un rimodellamento dinamico del citoscheletro. Controllando l’organizzazione della F-actina, WDR1 contribuisce a processi come la migrazione cellulare, l’endocitosi e l’attivazione delle cellule immunitarie, in cui è necessaria una rapida riorganizzazione dell’actina. Alterazioni della funzione di WDR1 sono state collegate a una deregolazione della segnalazione infiammatoria e a fenotipi immunitari, in linea con il suo ruolo nel mantenimento dell’omeostasi dell’actina nelle cellule ematopoietiche e in altri tipi cellulari. Nei modelli cellulari umani, WDR1 è spesso studiato per collegare la dinamica del citoscheletro alle risposte allo stress e agli output di segnalazione che dipendono dal traffico actino-dipendente e dal rimodellamento di membrana.

WDR1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di WDR1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

WDR1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus WDR1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione WDR1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di WDR1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus WDR1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da WDR1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via WDR1 nelle cellule tumorali con espressione di WDR1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.