WDPCP CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-405848

Übersicht

WDPCP (WD-repeat-containing planar cell polarity effector) kodiert ein zentrosomen- und zilienassoziiertes Protein, das für die Bildung primärer Zilien (primäre Ziliogenese) und die mit der planaren Zellpolarität verbundene Organisation erforderlich ist. WDPCP unterstützt das Andocken des Basalkörpers und die Axonembildung und trägt zur Assemblierung oder Funktion von Modulen der zilienären Übergangszone bei, die den Transport von Signalkomponenten koordinieren. Über seine Rolle in Zilien beeinflusst WDPCP zilienabhängige Signalwege wie die Hedgehog-Signalübertragung sowie umfassendere Zytoskelett- und Polaritätsprogramme, die für die Architektur epithelialer Gewebe wichtig sind. Eine Störung der WDPCP-Funktion ist mit Ziliopathie-Phänotypen verknüpft, darunter Entwicklungsanomalien und Multisystemdefekte, die mit beeinträchtigter zilienärer Signalgebung und Morphogenese vereinbar sind.

Das WDPCP CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des WDPCP-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des WDPCP-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von WDPCP nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die WDPCP-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von WDPCP-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der WDPCP-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf WDPCP-Exone abzielen, die für die WDPCP-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere WDPCP-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom WDPCP CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom WDPCP CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des WDPCP-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das WDPCP HDR-Plasmid (h) und WDPCP HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von WDPCP-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten WDPCP-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.