Plásmido CRISPR de Activación (h) VSTM2L: sc-414330-ACT

VSTM2L (V-set and transmembrane domain containing 2 like) codifica una proteína asociada a la membrana con un dominio tipo inmunoglobulina V-set, enriquecida en tejidos neurales e implicada en la comunicación célula–célula y la señalización extracelular. Los patrones de expresión descritos y los estudios funcionales vinculan VSTM2L con la diferenciación neuronal y los procesos sinápticos, lo que sugiere funciones en la regulación de programas del neurodesarrollo y de la actividad de las redes neuronales. Como factor asociado a la superficie celular o a la secreción, VSTM2L se investiga con frecuencia en vías que gobiernan la señalización intercelular, la regulación transcripcional aguas abajo de señales mediadas por receptores y la expresión génica específica de tejidos. La desregulación de la expresión de VSTM2L se ha explorado como una característica molecular en contextos de investigación neurológica y neuropsiquiátrica, así como en estudios más amplios de firmas transcripcionales relacionadas con el cerebro.

VSTM2L El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de VSTM2L sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

VSTM2L El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus VSTM2L en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional VSTM2L, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de VSTM2L. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo VSTM2L y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de VSTM2L en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía VSTM2L en células tumorales con expresión de VSTM2L silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.