Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Plásmido Doble Nickase (h) VPS39: sc-404507-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)VPS39 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa VPS39 (h) y el plásmido de doble nickasa VPS39 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a VPS39. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: VPS39 Anticuerpo (C-5): sc-514762
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) VPS39 | sc-404507-NIC | 20 µg | $410.00 |
VPS39 codifica una subunidad central del complejo de anclaje HOPS (homotypic fusion and vacuole protein sorting), que coordina los eventos de fusión entre endosoma tardío y lisosoma, y entre autofagosoma y lisosoma. Mediante interacciones con GTPasas Rab y la maquinaria SNARE, VPS39 contribuye a la maduración endolisosomal, la entrega de carga a los lisosomas y el recambio de proteínas de membrana y orgánulos. La alteración del tráfico dependiente de HOPS perturba la homeostasis lisosomal y el flujo autofágico, procesos vinculados con la neurodegeneración, la biología de las infecciones y la adaptación al estrés en células tumorales. En consecuencia, VPS39 se estudia ampliamente en vías que controlan la degradación intracelular, la dinámica de orgánulos y la señalización desde compartimentos endolisosomales.
VPS39 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus VPS39 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de VPS39. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de VPS39. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con VPS39 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.