Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Plásmido Doble Nickase (h) VPS33B: sc-406200-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)VPS33B consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa VPS33B (h) y el plásmido de doble nickasa VPS33B (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a VPS33B. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: VPS33B Anticuerpo (G-9): sc-398322
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) VPS33B | sc-406200-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) VPS33B | sc-406200-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
VPS33B codifica un componente central de la maquinaria de anclaje (tethering) de la clase HOPS/CORVET, que coordina la maduración de los endosomas, el acoplamiento de vesículas y la fusión de membranas dependiente de SNARE. Mediante la regulación del tráfico endolisosomal y la clasificación polarizada, VPS33B favorece la entrega adecuada de la carga a los lisosomas y a vías secretoras especializadas en células diferenciadas. La alteración de la función de VPS33B se ha vinculado con defectos en la polaridad epitelial, la biogénesis de los gránulos plaquetarios y la fisiología biliar y renal, lo que la hace relevante para el estudio de fenotipos multisistémicos de colestasis y hemorragia. Su papel en el transporte mediado por vesículas también se cruza con vías que controlan la autofagia, el recambio de proteínas de membrana y la homeostasis de los orgánulos.
VPS33B El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus VPS33B en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de VPS33B. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de VPS33B. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con VPS33B alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.