Vigilin Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-431035

Panoramica

Il gene murino **Hdlbp** codifica **vigilin**, una grande proteina legante l’RNA con molteplici domini KH che si associa a mRNA e a complessi ribonucleoproteici, influenzando la stabilità, la localizzazione e la traduzione dei trascritti. Vigilin è stata collegata alla regolazione dell’espressione di geni del metabolismo di lipidi e steroli tramite interazioni con mRNA specifici, connettendola a vie più ampie che controllano il bilancio energetico cellulare e l’omeostasi di membrana. Partecipa anche al controllo genico post-trascrizionale durante la proliferazione e le risposte allo stress, in linea con ruoli nel processamento dell’RNA e nella regolazione della traduzione. La disregolazione delle reti di RNA associate a vigilin è stata studiata in contesti che coinvolgono fenotipi metabolici e programmi di espressione genica alterati, rilevanti per i meccanismi di malattia.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Vigilin (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Hdlbp in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Hdlbp insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Hdlbp a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Vigilin.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Hdlbp per lo studio della segnalazione di Vigilin, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Hdlbp critici per la funzione di Vigilin
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Hdlbp per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Vigilin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal Vigilin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Hdlbp. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Vigilin Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR Vigilin (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Hdlbp per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Hdlbp definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.