Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Plásmido Doble Nickase (h) V-ATPase A1: sc-400975-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)V-ATPase A1 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa V-ATPase A1 (h) y el plásmido de doble nickasa V-ATPase A1 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a ATP6V0A1. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: V-ATPase A1 Anticuerpo (E-8): sc-374475
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) V-ATPase A1 | sc-400975-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) V-ATPase A1 | sc-400975-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ATP6V0A1 codifica la isoforma a1 de la subunidad a del dominio V0 de la H\+-ATPasa vacuolar (V-ATPasa), una bomba de protones multisubunidad que acidifica endosomas, lisosomas y vesículas secretoras. La acidificación de los orgánulos impulsada por la V-ATPasa sustenta la endocitosis mediada por receptores, la degradación lisosomal, la autofagia y el tráfico vesicular, e influye en la señalización de mTORC1 y en la detección celular de nutrientes a través de la función del lisosoma. Mediante el control del pH luminal, la V-ATPasa A1 también contribuye a la proteostasis y a los eventos de fusión de membranas necesarios para una clasificación eficiente de la carga. La desregulación de la actividad de la V-ATPasa y de la acidificación endolisosomal se ha vinculado con fenotipos del neurodesarrollo y neurodegenerativos, alteraciones de la función sináptica y defectos más amplios en la homeostasis celular relevantes para mecanismos de enfermedad.
V-ATPase A1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus ATP6V0A1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de ATP6V0A1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de ATP6V0A1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con ATP6V0A1 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.