Partículas Lentivirales de Activación (h) utrophin: sc-400522-LAC

El UTRN humano codifica la utrofina, un adaptador citoesquelético asociado a la distrofina que conecta la F-actina con el complejo distroglicano en el sarcolema, contribuyendo a organizar la estabilidad de la membrana y la transducción de señales. La utrofina participa en el ensamblaje y mantenimiento del complejo distrofina–glicoproteína y se vincula con interacciones con la matriz extracelular que influyen en la mecanotransducción y la polaridad celular. Su expresión está regulada durante el desarrollo y puede modularse en respuesta a lesión y remodelación muscular, lo que la hace relevante para estudios sobre la integridad de las miofibras y la organización de la unión neuromuscular. Las alteraciones en los niveles y la localización de la utrofina se evalúan con frecuencia en el contexto de las distrofino­patías y modelos relacionados de degeneración muscular, como un parálogo funcional dentro de la misma vía estructural.

Las partículas de activación lentiviral utrophin (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de UTRN en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral utrophin (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción UTRN, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de utrophin. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo UTRN y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.