UPII Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-423621

Panoramica

Upk2 codifica l’uroplachina II (UPII), un marcatore di differenziazione associato alle tetraspanine delle cellule “ombrello” dell’urotelio, che contribuisce all’assemblaggio della placca uroteliale apicale e al mantenimento della barriera urina–sangue. UPII partecipa al traffico di membrana e alla formazione di complessi di uroplachine che organizzano microdomini lipidici specializzati, sostenendo la polarità epiteliale e la funzione di barriera. Alterazioni della composizione delle uroplachine o dei programmi di differenziazione nell’urotelio sono state collegate a una compromissione dell’integrità della barriera, infiammazione e maggiore suscettibilità a danni del tratto urinario. Nei modelli murini, l’espressione di Upk2 è comunemente utilizzata per studiare l’identità di linea dell’urotelio e il rimodellamento epiteliale nella fisiopatologia della vescica.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO UPII (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Upk2 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Upk2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Upk2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina UPII.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Upk2 per lo studio della segnalazione di UPII, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Upk2 critici per la funzione di UPII
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Upk2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal UPII CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal UPII CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Upk2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal UPII Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR UPII (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Upk2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Upk2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.