Plásmido Doble Nickase (h) ULK1: sc-400516-NIC

ULK1 (quinasa 1 activadora de la autofagia similar a UNC-51) es una quinasa de serina/treonina que inicia la autofagia integrando señales de nutrientes y energía procedentes de mTORC1 y AMPK. Como núcleo catalítico del complejo ULK1, fosforila dianas aguas abajo para promover la formación del fagóforo y regular la mitofagia, la proteostasis y la adaptación celular al estrés metabólico. La autofagia dependiente de ULK1 se entrecruza con la señalización inmunitaria innata, las vías de supervivencia celular y el control de calidad de orgánulos, procesos que con frecuencia se alteran en contextos de cáncer, neurodegeneración y enfermedad inflamatoria. La actividad desregulada de ULK1 se ha asociado con cambios en la tolerancia al estrés y con la reprogramación metabólica, lo que la convierte en un nodo ampliamente utilizado para el análisis de vías en modelos de células humanas.

ULK1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus ULK1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de ULK1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de ULK1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con ULK1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.