Plásmido Doble Nickase (h) UCMA: sc-406716-NIC

UCMA (upper zone of growth plate and cartilage matrix associated) codifica una proteína secretada de la matriz extracelular dependiente de la vitamina K, también conocida como proteína rica en Gla (GRP), que está enriquecida en el cartílago y en tejidos vasculares. UCMA sufre γ-carboxilación de residuos de glutamato, una modificación postraduccional que favorece la unión al calcio y vincula a UCMA con la homeostasis mineral extracelular y la organización de la matriz. En biología musculoesquelética, UCMA se asocia con la diferenciación de condrocitos, la maduración de la placa de crecimiento y la integridad de la matriz cartilaginosa, conectándose con programas de señalización que coordinan la osificación endocondral y la remodelación tisular. Se ha informado que la expresión desregulada de UCMA y/o un estado de carboxilación alterado aparece en contextos de calcificación anómala, degeneración del cartílago y enfermedad articular inflamatoria, lo que la hace relevante para estudios mecanísticos de patología impulsada por la matriz.

UCMA El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus UCMA en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de UCMA. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de UCMA. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con UCMA alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.