Ubr4 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-427303
- alvos específicos: mouse
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- Ubr4 O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico Ubr4, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:Ubr4 Anticorpo (21-Y): sc-100615
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
Ubr4 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-427303 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
Ubr4 codifica uma ligase E3 de ubiquitina da família N-recognin, que dá suporte ao controle de qualidade proteica ao reconhecer resíduos N-terminais desestabilizadores e promover a degradação dependente de ubiquitina. Em células de camundongo, UBR4 contribui para a proteostase, para a regulação da estabilidade de complexos proteicos e para a coordenação de vias de degradação responsivas ao estresse, conectando-a de forma mais ampla à biologia do sistema ubiquitina–proteassoma e da via da regra N-terminal (N-end rule). Funções descritas também associam UBR4 ao tráfego de membranas e à homeostase neuronal, tornando-a relevante para estudos de mecanismos do neurodesenvolvimento e de neurodegeneração nos quais a sinalização por ubiquitina e a manutenção do proteoma estão comprometidas. Como a ubiquitinação faz interface com o controle do ciclo celular, a sinalização e a organização do citoesqueleto, a perturbação de Ubr4 é útil para dissecar como ligases de ubiquitina ajustam esses processos em estados normais e associados a doenças.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO Ubr4 (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Ubr4 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Ubr4, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Ubr4 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína Ubr4.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Ubr4 para a investigação da sinalização de Ubr4, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Ubr4 críticos para a função Ubr4
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Ubr4 para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo Ubr4 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo Ubr4 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Ubr4. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo Ubr4 Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR Ubr4 (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Ubr4 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Ubr4 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.