Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Ubr4 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-408481
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Ubr4 Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico Ubr4, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Ubr4 Antibody (21-Y): sc-100615
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Ubr4 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h) | sc-408481 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
UBR4 umano codifica l’E3 ubiquitin-ligasi Ubr4, una grande proteina citosolica che contribuisce al controllo di qualità e al turnover delle proteine dipendenti dall’ubiquitina. Ubr4 è collegata alla via della regola dell’N-terminale (N-end rule) e a programmi più ampi di proteostasi che influenzano la stabilità proteica, il traffico intracellulare e il rimodellamento del proteoma cellulare in risposta allo stress. Attraverso questi ruoli, UBR4 può influenzare processi quali l’endocitosi, la regolazione di proteine associate al ciclo cellulare e le risposte allo stress proteotossico. La disregolazione della segnalazione dell’ubiquitina e della proteostasi è stata associata a fenotipi neurodegenerativi e a stati cellulari legati al cancro, rendendo UBR4 un nodo utile per studi meccanicistici sull’organizzazione delle vie dell’ubiquitina.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Ubr4 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene UBR4 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del UBR4 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto UBR4 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Ubr4.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di UBR4 per lo studio della segnalazione di Ubr4, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni UBR4 critici per la funzione di Ubr4
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di UBR4 per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal Ubr4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Ubr4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus UBR4. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal Ubr4 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Ubr4 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia UBR4 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio UBR4 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.