Plásmido CRISPR de Activación (h) UBE2S: sc-404140-ACT

UBE2S (enzima conjugadora de ubiquitina E2 S) es una enzima E2 conjugadora de ubiquitina que extiende cadenas de poliubiquitina enlazadas por K11, actuando junto con el complejo promotor de la anafase/ciclosoma (APC/C) para favorecer la ubiquitinación oportuna y la degradación de reguladores del ciclo celular. A través de esta actividad, UBE2S ayuda a coordinar la progresión mitótica, la superación del punto de control del huso y una salida ordenada de la mitosis, contribuyendo así a la estabilidad genómica y a una proliferación controlada. La expresión o actividad desregulada de UBE2S se ha asociado con proteostasis anómala y alteraciones del control del ciclo celular en múltiples contextos patológicos, incluidos cánceres en los que es común la remodelación de la vía de la ubiquitina. Como nodo de señalización dependiente de ubiquitina, UBE2S también se utiliza para estudiar la comunicación cruzada entre la función del APC/C, el recambio mediado por el proteasoma y las vías sensibles al estrés que influyen en las decisiones sobre el destino celular.

UBE2S El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de UBE2S sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

UBE2S El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus UBE2S en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional UBE2S, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de UBE2S. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo UBE2S y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de UBE2S en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía UBE2S en células tumorales con expresión de UBE2S silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.