UBE2E3 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-423576

Descripción general

Ube2e3 codifica la enzima de conjugación de ubiquitina murina UBE2E3, un componente E2 del sistema ubiquitina–proteasoma que transfiere ubiquitina desde las enzimas E1 hacia las ligasas E3 para regular el recambio proteico y la señalización. Mediante la ubiquitinación, UBE2E3 contribuye a la proteostasis, las respuestas al estrés y el control de vías asociadas al ciclo celular y al daño del ADN, al modular la estabilidad de los sustratos y los programas transcripcionales posteriores. Como modulador del control de calidad proteica y de la señalización reguladora por ubiquitina, una actividad alterada de UBE2E3 puede influir en la homeostasis celular en contextos relevantes para la neurobiología, la inflamación y fenotipos asociados al cáncer. El estudio de las redes de ubiquitinación dependientes de UBE2E3 ayuda a definir cómo las enzimas E2 ajustan la dinámica de las vías y la especificidad de sustrato en distintos tejidos.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO UBE2E3 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Ube2e3 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Ube2e3 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Ube2e3 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína UBE2E3.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Ube2e3 para la investigación de la señalización de UBE2E3, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Ube2e3 críticos para la función de UBE2E3
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Ube2e3 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido UBE2E3 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido UBE2E3 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Ube2e3. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR UBE2E3 (m) y el plásmido HDR UBE2E3 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Ube2e3 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Ube2e3 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.